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產品描述

模基生物小鼠氣管類器官培養基套裝是一種化學定義的細胞培養基，用于建立和維持來自小鼠氣管干細胞的小鼠氣管類器官。氣管的自我更新上皮細胞是由基底細胞的增殖驅動的。小鼠氣管類器官包含基底細胞、纖毛細胞、分泌細胞和少量神經內分泌細胞，因此類器官顯示了氣道的所有特征。因此，上皮細胞在結構、細胞類型組成和自我更新動力學方面具有很大的應用前景，可用于氣道穩態與疾病的研究。

產品信息

其他自備材料和試劑

MG&ABW基質膠

上皮類器官基礎培養基

類器官消化液

潤洗液

類器官冷凍保存培養基(無血清)  

胎牛血清（FBS）

DPBS (1X)，液體，不含鈣和鎂  

小鼠氣管類器官完全培養基的制備

使用無菌操作技術配制小鼠氣管類器官完全培養基。以下是準備 10mL 完全培養基的示例，如所需量不同，可相應調整

用量。

1. 冰上解凍 Mouse Airway Organoid Supplement B (50x)和 Mouse Airway Organoid Supplement C (250x)。

注意： 解凍后，建議將 Mouse Airway Organoid Supplement B (50x)和 Mouse Airway Organoid Supplement C (250x)

分別分裝后保存取用，避免反復凍融。

2. 將 200uL Mouse Airway Organoid Supplement B (50x)，40uL Mouse Airway Organoid Supplement C (250x) 加至

9.76mL Mouse Airway Organoid Basal Medium 中，充分混合，配制成 10mL 小鼠氣管類器官完全培養基。

注意：配制后的小鼠氣管類器官完全培養基可在 2-8°C 儲存，建議在兩周內使用。Mouse Airway Organoid Supplement

B(50x)內含有細菌及真菌抗生素(50x)。

小鼠氣管類器官培養

小鼠氣管類器官的原代建立

1. 在含有抗生素的預冷DPBS中收集小鼠原代氣管組織。

2. 用DPBS沖洗兩次組織。

3.在細胞培養皿中使用外科剪刀或手術刀將組織切成1-3毫米的小碎片。

4. 用10mL類器官消化液在15mL離心管中37°C消化組織碎片，孵育時間從30分鐘到1小時不等。仔細監測消化過程，每5-10分鐘搖一次離心管，或上下顛倒混勻。當大多數組織碎片能夠通過1mL移液管尖端時，消化過程就完成了。

5. 將FBS加入組織消化液中，最終濃度為2%，用100 μm細胞過濾篩過濾。

6. 收集過濾后的細胞，在4℃下250g離心3分鐘。如發現明顯的紅色顆粒，抽吸上清，用2mL紅細胞裂解液重懸紅細胞在室溫下靜置1分鐘，然后在4℃下250g離心3分鐘。

7. 棄去上清液，將顆粒重懸于上皮類器官基礎培養基，在4℃下250g離心3分鐘，再次重復此步驟。

8. 棄去上清液，將細胞懸液重懸于基質膠中。基質膠應該保存在冰上以防止固化，此步驟應盡快完成?；|的用量取決于基質的大小，推薦重懸密度為每 10uL基質膠懸液包含大約10,000個細胞。

注意：基質膠稀釋比例應在 70%以上以保證培養過程中基質膠的結構穩定性。

9.將基質膠和組織細胞的混合懸液點入 24 孔板底部正中央，每孔 30uL 左右，避免懸液接觸孔板側壁。

注意：為防止基質膠室溫凝固，此步驟應盡快完成。

8. 將接種完成后的培養板至于 37℃二氧化碳恒溫培養箱中，孵育15-25分鐘待基質膠凝固。

9. 配制小鼠氣管類器官完全培養基。

10. 待基質膠完全凝固后，加入已配制好的小鼠氣管類器官完全培養基，24 孔板每孔 500uL。

11. 將 24 孔板置于 37℃二氧化碳培養箱中培養，直到類器官需要進一步的實驗。

類器官的傳代培養

1. 用經過潤洗液潤洗的槍頭吹打刮取類器官，并將類器官和培養基的懸液轉移至經 過潤洗液潤洗的 1.5mL EP 管中。

2. 用經過潤洗液潤洗的槍頭用力重懸類器官懸浮液，使得類器官與基質膠分離。

3.250g 離心力室溫離心 3min。

4.棄上清，使用類器官消化液或用機械破壞。對于使用類器官消化液的細胞解離，在類器官消化液中重懸類器官懸浮液，移液器反復上下吹打并置于37°C孵育，直至類器官解離。使用帶濾芯移液頭每2分鐘反復上下吹吸8次，以幫助破壞類器官。密切監視消化過程使在類器官解離液中的孵育時間最短。如發生機械故障，在1.5 mL上皮類器官基礎培養基中重懸類器官懸液。小心地用移液管吸取類器官懸浮液，反復上下30次，這將有助于消化。

警告:不要在類器官解離液中解離超過5分鐘，因為這可能會導致較差的類器官的生長甚至破壞。根據經驗，如果是小塊細胞的混合物，可以觀察到由10-50個細胞組成的細胞團，消化就完成了。

5. 消化完成后，用1ml上皮類器官基礎培養基進行一次沖洗，然后室溫下250g離心3分鐘。

6. 棄上清，用適量的基質膠重懸類器官沉淀，重懸后置于冰上，重懸時間不超過 30s 以避免基質膠過早凝固。

注意：基質膠稀釋比例應在 70%以上以保證培養過程中基質膠的結構穩定性。

7. 將基質膠和類器官的混合懸液點入 24 孔板底部正中央，避免懸液接觸孔板側壁，每孔 30uL 左右。

注意：為防止基質膠室溫凝固，此步驟應盡快完成。

8. 將接種完成后的培養板至于 37℃二氧化碳恒溫培養箱中，孵育 15min 左右待基質膠凝固。

9. 配制小鼠氣管類器官完全培養基。

10. 待基質膠完全凝固后，加入已配制好的小鼠氣管類器官完全培養基，24 孔板每孔 500uL。

11. 將 24 孔板置于 37℃二氧化碳培養箱中培養，直到類器官需要進一步的實驗。